夜勤病栋

新城礼美(新城 礼美(しんじょう れみ)，(声优：逢川奈奈/同左/同左))

圣尤利安娜医院妇产科的护士主任。医疗疏失被比良坂所知遭到胁迫。起初强烈反抗比良坂暴行，后来渐渐喜欢上比良坂的“实验”而深陷其中无法自拔，情愿被虐待都不报警。

神宫寺成美(神宮寺 成美(じんぐうじ なるみ)，(声优：歌织/星置薰/歌织))

圣尤利安娜医院妇产科的局长，亦是比良坂的大学同学。曾与比良坂相爱，怀孕后被比良坂要求堕胎后抛弃而怀恨在心。从第一次被比良坂“实验”后喜欢上这种“实验”，真心喜欢比良坂，可惜比良坂由始自终都是当成是实验品，相遇七瀬恋后，感觉自己的遭遇重新发生在七瀬恋身上而感到不安，决定杀死比良坂，防止自己的遭遇再一次重演。可惜最后比良坂没死反而自己自杀死了。

比良坂龙二(比良坂 竜二(ひらさか りゅうじ)，(声优：-/郷野三郎/-))

圣尤利安娜医院妇产科的医生，本作男主角。受到神宫寺成美的委托来调教圣尤利安娜医院的护士们。外表是一副热爱医学的医生，但是心却是扭曲的变态人格，喜欢拿女性做“实验”，使用各种各样自创方式残忍虐待自己的“实验品”，最后被七瀬恋所杀。由飞田展男、堀川亮配音，游戏中为圣尤利安娜医院妇科的医生。

儿玉光(児玉 ひかる(こだま ひかる)，(声优：白坂美绪/同左→榊るな(OVA Kranke 儿玉光)/青叶りんご))

圣尤利安娜医院小儿科的护士。被比良坂知道她跟她住院的妹妹儿玉爱不是亲生姊妹而受到胁迫。后来喜欢上“实验”，而且还协助比良坂对其他人做“实验”，最后被抓后在警察局里面还大骂七瀬恋是叛徒。

七濑恋(七瀬 恋(ななせ れん)，(声优：御影由宇/同左/同左))

《夜勤病栋系列》的重要角色，圣尤利安娜医院(圣ユリアンナ病院)妇产科的护士。因为她的男友拳击手为了她和黑道发生冲突，葬送拳击手生涯，这件事被色情医生比良坂所知而受到胁迫，成为性奴隶。本身没有主见，不懂得报警自救，被医生比良坂性侵之后患上斯德哥尔摩情节，开始喜欢比良坂，自愿陪伴他进行性变态玩乐。怀孕后看到比良坂依然和其他护士有染，又从神宫寺成美的经历口中得知比良坂连亲生骨肉都杀、毫无人性的真面目，为了保护自己的骨肉最后把比良坂杀死。《夜勤病栋·贰》故事的4年前离开圣尤利安娜医院后行踪成谜，后来任职圣カトレア総合病院的护士主任。

藤泽亚子(藤沢 亜子(ふじさわ あこ)，(声优：远野沙那/同左/草柳顺子))

圣尤利安娜医院药局的护士，亦是藤泽制药的千金。遭到比良坂设计私藏敌方制药厂的样本受到胁迫。由于家庭中被过分溺爱而接触社会过少，不会识别坏人，被比良坂一直利用来做“实验”，是个不折不扣的傻瓜。