东京篇
主角绯村剑心流浪至东京，因为神谷薰的挽留而留在东京。其后认识了明神弥彦、相乐左之助及高荷惠等人，又与前幕府杀手鹈堂刃卫、御庭番众首领四乃森苍紫决斗，其间剑心经历了多次战斗，令剑心自觉慢慢变回昔日的刽子手拔刀斋(千人斩拔刀斋)(人斩り抜刀斎)。最后在与幕末时代的对手前新撰组第三小队组长斋藤一决战及得知志志雄一党的阴谋后，独自前往京都与志志雄一党对决。(漫画、电视动画)
京都篇
前维新志士志志雄真实及他的同党正在秘密活动，目的是推翻明治政府，由他带领日本成为强国。剑心为了阻止志志雄的计划得逞，独自离开东京前往京都。后来剑心的同伴亦逐一赶到京都寻找剑心，剑心从师傅比古清十郎身上学会飞天御剑流的最终奥义“天翔龙闪”后，与其同伴相乐左之助及斋藤一、四乃森苍紫联手，终于打败了志志雄一党。(漫画、电视动画)
漫画及电视动画的东京篇及京都篇在故事上大致相同。在京都篇完结后，由于当时漫画只是刚开始连载人诛篇，跟不上电视动画的制作进度，因此电视动画另行制作了岛原篇、胜海舟篇、由太郎篇(黑骑士团篇)及风水篇。但受到原作版本的读者批评与原作版浪客剑心的世界观相异，因此后期收视不太理想，在风水篇后便终止制作。
追忆篇
故事发生于剑心在幕末身为长州派维新志士时担当刽子手的年代(东京篇之前的故事)。故事讲述剑心与第一任妻子雪代巴的过去，解明了剑心左边面颊的十字疤之谜。OVA故事共分四幕，第四幕尾段雪代巴为阻挡敌人向剑心发出最后一撃的同时，亦被剑心一剑杀死，临死前用自杀的小刀在剑心面上划上一刀，与未婚夫清里和剑心死斗时划下的一刀，交织成剑心脸上的十字疤。漫画版的追忆篇连载于人诛篇初期剑心的回忆自述，而OVA则独立讲述剑心的过去。(漫画、OVA)
OVA版本的追忆篇内容虽然与漫画原著并无太大出入，但其风格却与之前的电视动画版大大不同。彻底摆脱了少年漫画的风格，特别是拔刀斋出招时其没有像过往一般大喊出必杀技名称，而一般很难于少年漫画及电视动画中出现的大量血花四溅的残酷场面亦一一呈现。坊间对此等手法毁誉参半，例如其血腥露骨的场面可能不适合原作的主要读者(小学生、中学生)，但亦得到一般未看过原作的人支持。而本作于日本海外评价亦相当高，在美国的销售亦曾登上全年DVD销售榜的第7位。
人诛篇
雪代巴之弟雪代缘当年亲眼看到姐姐死于剑心的刀下，长大后集合了“六人同志”，向剑心展开复仇行动(在上海流浪垂死之际被好心日本家庭收留，却因为只想练能攻克剑心武功的念头而杀死对方一家并取走武功秘笈单刀法而自练出倭刀术以及其绝招虎伏绝刀势)。由于雪代缘的阴谋，使剑心一度以为神谷薰被杀而意志消沈(神谷薰之死令当时少年JUMP周刊的读者引起一阵回响)。最后剑心回复斗志并打败雪代缘，雪代缘持着其姊的日记消失在剑心等人面前。(漫画)
番外篇
结束连载以后以SP模式连载两个番外篇，分别是《早春樱花》及《弥彦的逆刃刀》。前者提到了结局之后众人各自的新旅程，如左之助的世界一圈之旅到了蒙古。后者是弥彦以神谷活心流行侠仗义的活跃篇。
第零幕
2012年初由日本漫画杂志“JUMP SQ”公开了《浪客剑心》将于八月号开始推出新连载《第零幕》，与1999年结束的连载相隔十三年的新篇章。
北海道篇
2017年9月连载的新续篇，故事发生在“人诛篇”后5年(1885年)，绯村剑心和神谷薰动身前往北海道寻找薰的父亲神谷越路郎，同时和环游世界回来的左之助、在日本流浪的宗次郎、在北海道服刑的安慈、与调往北海道的斋藤一重逢。就连新撰组的永仓新八，也将在“北海道篇”出现。
三年前，勇者席恩·布雷丹利用圣剑之力将地狱之门封印，人与恶魔的战斗得以结束，但由于封印的不完整，经过一段时间地狱之门再次开启，世界各地的恶魔直到现在也不断的涌现出来袭撃人类。
然后在地狱之门开启后的三个月，一座村庄的平凡好色农夫少年托卡·史考特，某日自制的陷阱居然意外杀害勇者席恩，为了湮灭证据，便埋葬了勇者席恩尸体，但隔天早上托卡成了勇者席恩的外貌，原来是勇者的原伙伴尸术师的安莉·赫兹瓦丝将托卡他的精神用尸术转移到勇者的体内。而后，被威胁为了代替勇者席恩为了拯救世界，并与青梅竹马尤娜·优妮丝为了将地狱之门封印而共同踏上旅途冒险的故事。
基本设定
恶魔
从地狱之门后跑出来的生物，拥有超过人类的魔力以及使用魔法的能力。嗜好吞食人类。心脏部位是魔晶石，基本上天生不会魔法的人类都需要借助魔晶石的力量才能使用魔法。
尸术师
从地狱之门后跑出来的“人类”，拥有操纵尸体、灵魂的能力。
重要道具
圣剑
作为勇者象征的武器，同时也是与封印地狱之门等一系列事情相关的重要道具。为神所制造，输入魔力后可以变形，但是魔力的强度也会影响到剑身的强度。
灵魂之滴
可以在短时间内提升服用者的魔力，喝多了有变成白痴的风险。主角托卡在初期魔力不足时多次使用。
人造圣剑
人类仿造出来的圣剑，大多数的能力和原版没什么关系，唯有由法洛姆王持有的那一把是原版的完全复制。剑身基本上是黑色。
战神之铠
能使装备者拥有与神同等的魔力和强大的防御力。持有者为勇者的伙伴之一。
与本作副标题相关的“秘密藏身处”，当莱莎与同伴随着冒险及故事发展到一定程度时，就可以使用作为莱莎与同伴的据点。除了可以关于炼金术相关的调合外，还可以随玩家喜好变动秘密藏身处的内部装设与据点的外观。根据不同种类的零件有部分能够提升使用角色的状态，在冒险时得到更好的应对。