六田胜/店长(六田 勝(ろくた しょう)/てんちょー，声：伊藤健太郎)
Alcohol Soft的社长。同时兼任Alcohol Soft一楼电脑商店的店长。对美少女游戏不算很了解，偶尔的一时冲动会给周围的人带来麻烦。
下田香织(下田 かおり(しもだ かおり)，声：川澄绫子)
Alcohol Soft的策划、原画和CG。是以猫耳帽为标志的温柔女性。非常了解美少女游戏，对美少女和游戏创作都充满热情。虽然会冷静地站在公司的角度思考，但也很关心乐叶。
木嶋拓海(木嶋 拓海(きじま たくみ)，声：寺岛惇太)
与堀江青同班的男生，人缘广泛朋友众多，被人称为“现充王”，喜欢堀江青并且向她告了白。十分可靠，虽然堀江青时不时地会误会他的想法而经常不知所措，但就是这样才十分吸引拓海。
同样毫无恋爱经验，告白后为了能正式确立恋爱关系而努力，但在能够与青好好相处的氛围中总是毫无行动，在一次意外中不小心对青说出他还是处男的事实。
堀江青(堀江 青(ほりえ あお)，声：和气杏未)
身材姣好(G罩杯)的女高中生，名字来自日语中的“青姦”，即“在野外性交”，但直到小学二年级自我介绍时才知道这个名字的来源是什么意思，故而对自己的名字十分不满，不喜欢别人用全名称呼她。
成绩优秀，考试可以做到全科满分。常会做饭给父亲吃。在别人看来是高岭之花。没有朋友(但其实许多人想跟她搭话)，在木岛拓海面前会出现傲娇的一面。为了摆脱自己的父亲考上外地的国立大学而努力学习，在被木嶋告白后由于时常在脑内妄想各种性行为的体位导致成绩下降，而纯情的木嶋根本无法理解青的想法，后在暑假时二人经历了暑期补习合宿，青发现自己爱上了木嶋已经无心学习。在一次意外中木嶋不小心对青说出他还是处男的事实。
为了挽救恶化的成绩，青开始刻意疏远木嶋，在木嶋向其表达了真心后两人复合并一起学习。到了高二，为了提高保送国立大学的可能性，决定赴美留学，对于异地恋，两人都感到不安，但在青回国后，两人的关系并未受到影响。升上高三后，面临着越来越大的应考压力的青更加无心学习，满脑子都是盼望着等考试结束后跟木嶋来一发。后来两人都考上了位于九州地区的大学，租了同一栋公寓，且公寓的房东恰好就是青的母亲。
在父亲的影响下有着较为丰富的性知识，但却毫无恋爱的经验，还被父亲灌输过“男人就是性欲的集合”的思想。
儿玉光(児玉 ひかる(こだま ひかる)，(声优：白坂美绪/同左→榊るな(OVA Kranke 儿玉光)/青叶りんご))
圣尤利安娜医院小儿科的护士。被比良坂知道她跟她住院的妹妹儿玉爱不是亲生姊妹而受到胁迫。后来喜欢上“实验”，而且还协助比良坂对其他人做“实验”，最后被抓后在警察局里面还大骂七瀬恋是叛徒。
七濑恋(七瀬 恋(ななせ れん)，(声优：御影由宇/同左/同左))
《夜勤病栋系列》的重要角色，圣尤利安娜医院(圣ユリアンナ病院)妇产科的护士。因为她的男友拳击手为了她和黑道发生冲突，葬送拳击手生涯，这件事被色情医生比良坂所知而受到胁迫，成为性奴隶。本身没有主见，不懂得报警自救，被医生比良坂性侵之后患上斯德哥尔摩情节，开始喜欢比良坂，自愿陪伴他进行性变态玩乐。怀孕后看到比良坂依然和其他护士有染，又从神宫寺成美的经历口中得知比良坂连亲生骨肉都杀、毫无人性的真面目，为了保护自己的骨肉最后把比良坂杀死。《夜勤病栋·贰》故事的4年前离开圣尤利安娜医院后行踪成谜，后来任职圣カトレア総合病院的护士主任。
楠优爱(楠 優愛(くすのき ゆあ)，声优：高桥智秋)
生日：10月18日，身高：159cm，体重：53kg，三围：87-60-90，血型：A型。
本作女主角之一，对众人都很温柔的学姐，即使对后辈也使用敬语。喜欢动画和漫画。
私立翠明学园高校3年生。温柔文雅的姐姐型角色，本性善良，初时为调查拓巳而伪装接近，深深伤害男主。其实是个随时黑化的病娇少女，有着让人发颤的五段质问法。
她有些胆小，反过来却极能忍耐，决定下来的事情就一定要完成，但一生气口气就会变得冷酷高压，表情也截然不同。优爱的双胞胎妹妹楠美爱是“新生一代的疯狂”最初的遇害者，然而本作中的优爱其实是美爱，二人在事件之前开玩笑地互换了身份，美爱又因人格分裂而遗忘了此事。她在独自调查此案的过程中怀疑主角拓巳是真凶且有多重人格，随后借机接近却仅仅数日便被识破，之后以特有的“五段活用诘问”单方面地迫向拓巳。优爱在医院遭遇希科技的刺客时，被妹妹的幻像逼迫跳楼，生死存亡之际觉醒获得Di-sword。在外传中，优爱表明了自己的宅女身份和对剧中剧《Blood Tune the Animation》的喜爱，她的运动白痴的特点也表露无遗。作为优爱还是美爱而生对她来说是一个重大的抉择。
河合亚芽里(河合 アメリ(かわい アメリ)，Kawai Ameri) 声：花野香/下田麻美
身高：159cm / 生日：8月9日/ 血型：B/ 三围：B83(C)/W58/H85
裕理的青梅竹马兼同学，和裕理如家人般的亲近。创圣学院一般学部S课程学生(最上级生)，父亲是一般学部的理事，母亲是大企业建筑公司的会长。做事有自己的一套，但不会有特别的计划。喜欢裕理，然而自己对恋爱不擅长，一直都只是朋友，视真白为对手。另外，虽然名字像是西方人但实际无关。
泉户真白(泉戸 ましろ(みと ましろ)，Mito Mashiro) 声：松田理沙/力丸乃梨子
身高：165cm / 生日：4月3日/ 血型：O/ 三围：B86(D)/W57/H88
开学日突然出现的少女，创圣学院女子学部S课程学生(最上级生)。其真正身份是以前绮久罗美守毘卖“化成”的太转依，懂得使用咒术，“真白”是裕理取的名称。外表和人类分别不大，但有狐耳和尾。知识非常古老，不懂得操作电器。对裕理在恋爱上积极展开攻势，之后更住在泉户家。保持着绮久罗美守毘卖的思想和记忆，要和裕理创造“人类和太转依共存的世界”。
泉户裕理(泉戸 裕理(みと ゆうり)，Mito Yūri) 声：无/日野聪、冰见はるか(第四话女装)
男主角，创圣学院一般学部的学生，惟家中是神社，知道很多关于神道方面的知识。喜欢研究摩托车、汽车等的机械，并渴望成为一级技工或设计师，但有时会太沉迷而被当作怪人。在学校方面，学习和运动也可以，但在讨厌科目的课堂中会毫不忌讳地睡觉。在家中亦收藏了大量的色情片。另外，裕理是八衢的血统而拥有“退魔灵能”，对太转依来说是种不能对抗的力量，但裕理自身并无自觉。然而因为和“真白”的约定，要创造“人类和太转依共存的世界”，而投身对太转依的战斗。
芙琉奈(フリュネ，声：津田美波)
16岁的巫女，由修道院抚养，后来因私自出走而被追捕。幸而遇见了克莱因而得救。登场时穿着巫女服。情绪表现毫无保留，因此会有突然流泪及一把抓着克莱因的时候。诚恳地为克莱因永远灿烂的笑容而许愿。没有羞耻感，即使被看见裸体、当众换衣服也不在意。游泳是裸泳。
虽然剧中并没有明确点出，不过芙琉奈被修道院的大司教(也就是自己的养父)染指过的可能性很高，然而在动画第八集，芙琉奈却被大司教执行类似处女审问的检查，故此疑虑有待商榷。做为芙琉奈似乎都得接受“污秽”。其养父称她为“NO.152589”
拥有“芙琉奈”之名的女性，也被称为“钥匙”。自身也身为“钥匙”。本作的芙琉奈，除了16岁的身体外，还有因为知晓了爱，所以才能做为神的容器。
僧院中有许多“芙琉奈”，毫无用处的就会被打上烙印然后消失。目前只有一个“芙琉奈”被扶养长大——也就是本作的女主角。
作为奈莎的灵魂所准备的肉体容器。
之后与奈莎结合，共同使用一个身体，并且与克莱因住在一起。
高远夜雾(高遠 夜霧(たかとお よぎり)，声：内山昂辉)
本作主角，认真的时候有帅气的一面，在学校里大多都是打瞌睡的状态。没有获得贤者的恩赐，但是在原本的世界中有令世界各国都感到恐惧的能力：“即死”，只要有意愿不管是活是死、有形无形，高远夜雾都能凭借自己的思想令其“死去”，只要高远夜雾想要“杀死”的东西，任何因果倒转或是时光倒流、起死回生的作弊能力都无法救回来。
现实世界被研究人员称为“ΑΩ”，教团人员则以“御隐大人”称之，幼年时作为日本替代核武的对外威胁手段被养在地下研究设施，受到美国在内所有研究机关的高度重视，他的能力被认为能轻易引发世界末日。
二宫谅子曾对卡罗尔表示：几乎没有任何人，任何事物能限制高远夜雾，虽然外表看上去人畜无害，却不能半点分心，研究所已经将其归到“灾祸之神”的类别。人类对他束手无策，只能完全接受这个灾祸的到来，然后向他双膝跪地，祈求他不要发怒。