志志雄真实
CV-池田政典
身高：170公分
体重：59公斤
生辰：1848年8月
年龄：31
星座：狮子座
血型：O型
出生地：京都
武器：无限刃
流派：我流
必杀：终极秘剑·火产灵神
幕末时来自长州派的一名维新志士。由于“禁门之变”，当时担任“影子杀手”任务的绯村拔刀斋为了躲避新撰组的追杀而不得不隐姓埋名，之后“影子杀手”的任务就由剑术和绯村不相上下的长州志志雄担任。但是维新派并不信任志志雄，一直认为志志雄野心勃勃，怕志志雄一旦把杀手内幕公开，维新政府就可能被颠覆。于是在志志雄执行完了一次任务以后，派火枪队将志志雄击毙，然后焚尸。没有想到志志雄在这样的情况下居然活了下来，然后怀着满腔怒火，开始了对维新政府的报复行动。最终与剑心，斋藤，左之助，苍紫轮战，败于剑心。由于当初焚尸时将身上汗腺烧坏，被医生诊断只能全力战斗15分钟，最后死于自身的超高温(与剑心战斗30分钟，身体无法承受极值高温，黯然自燃而死。)
四乃森苍紫
CV-安原义人
身高：182公分
体重：72公斤
生辰：1853年1月
年龄：26
星座：水瓶座
血型：A型
武器：小太刀
流派：御庭番式拳法小太刀二刀流
必杀：回天剑舞六连
御庭番众的首领。属小太刀二刀流，“回天剑舞六连”是他的绝招。 御庭番众是幕府时期的情报组织，而苍紫作为明治时御庭番众的首领，为了证明御庭番众是最强的组织，而和剑心发生了冲突。结果苍紫不敌剑心，手下四大高手全部死于非命。伤心绝望的苍紫发誓要杀死剑心，以雪前耻，捍卫御庭番众最强者的名誉。于是他与志志雄合作，处处与剑心为敌。也许是苍紫的良心尚未完全泯灭，在剑心与志志雄决斗之时助了剑心一臂之力。苍紫从此也清醒了过来，开始自己的武学修行。
雪代巴(配音员：岩男润子，真人演员：有村架纯)
剑心的第一任妻子，为报未婚夫清里被杀之仇而接近剑心，在相处中却打消了复仇的念头并爱上剑心，最后为救剑心而被剑心误杀，于剑心脸上划上第二道刀痕后死去。巴在剑心脸上留下伤痕的原因有两种版本：漫画版是巴为了救剑心，以身体挡在他与敌人之间的时候，巴的怀剑落下，不小心划过剑心的脸庞;而动画OVA版的巴则是对剑心怀着又爱又恨的心理，刻意在他脸上划上第二道刀痕，希望剑心能谨记在心。
神谷薰是日本漫画家和月伸宏的漫画作品《浪客剑心》的女主角。在故事中，神谷薰在东京开设道场，传授神谷活心流。神谷薰后来收留浪人绯村剑心，逐渐与他发展出浓厚感情。
神谷薰也出现在《浪客剑心》系列电影、动画及相关媒体中，包括大量电子游戏、OVA。
神谷薰在东京开设道场，传授神谷活心流。她从已故的父亲继承战斗风格和一个小型道场。她的父亲于西南战争中为了保护同志殉职。在故事的开头，她独自经营道场，虽然没有任何学生，直到绯村剑心出现，帮助她重振道场。她个性独立，占有欲强，富有同情心、勇敢、好胜、意志坚强，是出色的战士。神谷薰烹调料理的技术很糟，也能够看到对方优点。在故事开头，她正在寻找杀手拔刀斋，并因此被绯村剑心搭救。
每当另一个女孩接近绯村剑心时，神谷薰都会感到忌妒。明神弥彦是神谷薰第一位学生，他曾是东京士族，父母双亡后沦为扒手。
当明治政府要求绯村剑心杀死前志志雄真实后，绯村剑心与神谷薰离别后离开东京，前往京都。绯村剑心离开后，薰非常沮丧，但很快拿出勇气前往京都，准备与绯村剑心相见。她之后与卷町操合作击败十本刀本条镰足。
神谷薰与绯村剑心回到东京，发现雪代缘的复仇计划。然而，实际上雪代缘的目的不是绯村剑心，而是神谷薰。雪代缘绑架薰并留下她的身体复制品，让绯村剑心以为未能挽救神谷薰而自暴自弃。绯村剑心最终发现神谷薰没有死，于是顺利打倒雪代缘。神谷薰和绯村剑心最终结婚，有一个儿子名为剑路。
高荷惠
日语名字：たかに めぐみ
罗马音：Takani Megumi
身高：166公分
体重：45公斤
生辰：1857年12月
星座：山羊座
属性：腹黑 傲娇
血型：B型
动画初次登场: 第8集 新的战斗，闯进来谜样的美女
发色：黑色
喜欢的人：绯村剑心，对左之助没明显表达好感。(tv原创内容有推cp迹象)
出生地：会津
装备：药、绷带
声优：土井美加
一名来自会津的女医生。因在战乱中与家人失散，而来到东京。不料却被人禁锢起来开始制做鸦片，因而良心受到谴责，于是开始设法逃离这个是非之地。终于，她在剑心和左之助的帮助下脱离了束缚，并成为了一名优秀的女医生。
雪代缘
CV-佐佐木望
身高：175公分
体重：68公斤
生辰：1855年5月
年龄：24
星座：双子座
血型：A型
出生地：东京府
武器：倭刀
流派：倭刀术
必杀：虎伏绝刀式
雪代巴的弟弟。上海黑帮老大。拥有“狂经脉”，幕末，独自一人远离日本来到了上海，学会了中国刀术——倭刀术。目睹姐姐惨死在剑心手中的缘，悲愤不已，变得满头白发，下定决心要置剑心及其心爱的人于死地。其实，缘并不是为了替姐姐报仇，而是因为嫉恨姐姐对剑心的爱超过了对他的爱。在这样的心理作用下，缘开始了他的“人诛”计划，最终失败，被薰感动。
明神弥彦
CV-富永美衣奈 (CD-高山南)
身高：128公分
体重：23公斤
生辰：1868年8月
年龄：11
星座：狮子座
血型：B型
武器：竹刀(逆刃刀)
流派：神谷活心流
必杀：夺刃术。
弥彦的父亲战死上野战争，母亲也得了重病。弥彦母子为了治病借钱， 但是弥彦母亲的病终究还是没有治好。债主为了让他还钱，就逼迫弥彦去偷钱，终于有一天，他碰到了剑心和薰，他们帮助弥彦脱离了困境，而弥彦也成了薰的首席大弟子。
相乐左之助(配音员：上田祐司(日本)，真人演员：青木崇高)
本作品男主角之一。
在第4集初登场。前赤报队准队员，敬仰队长相乐总三，后来明治政府以伪冒官军的罪名将总三处死，令左之助痛恨维新志士及明治政府。左之助遇到剑心后，对维新志士开始改观。与剑心成为莫逆之交。主要以拳脚和斩马刀为武器。
他以前是赤报队的成员，不甘赤报队被明治政府纤灭，于是他成为一名战士，经由聘请的战斗来平息他的愤怒。在一系列的介绍中，他遇见浪人绯村剑心，并被他轻松击败，剑心说服他停止聘请的战斗，而开始保护人民。之后，左之助成为剑心的朋友并与剑心的伙伴一起战斗。
濑田宗次郎
CV-日高法子
身高：163公分
体重：51公斤
生辰：1861年9月
年龄：18
星座：处女座
血型：AB型
出生地：神奈川县
武器：菊一文字则宗
流派：我流(天剑)
必杀：瞬天杀
粤语配音：周文瑛
“天剑”宗次郎，他是刺杀大久保利通的凶手，武学天赋极高，速度极快(比剑心还快)，乃十本刀之首。宗次郎自小生活在一个被人随意打骂，任人欺负的环境之中，为了在这样的环境之中生存，他只有微笑着面对困境。因为他如果在被欺负的时候哭了，也许就会遭到更严厉的惩罚。有一天他窥见了志志雄杀人的一幕，便开始接受了“这个世界是弱肉强食”的观点，并且在一次生死攸关的时刻，杀死了所有欺负他的人，开始追随志志雄，走上了颠覆维新政府的不归路。最终被剑心用天翔龙闪打败后，自离志志雄，去流浪寻找自己人生的意义。
卷町操
CV-樱井智
身高：149cm
体重：37kg
生日：1863/11
年龄：16
星座：射手座
出生地：东京府
血型：B
流派：御庭番式拳法/苦无术
御庭番众的成员，性格非常开朗活泼，在四乃森苍紫误入修罗道期间，自称御头，从小喜欢四乃森苍紫，最后算是得偿所愿。
比古清十郎
CV-池田秀一
身高：189公分
体重：87公斤
生辰：1836年10月京都府出生
年龄：43
星座：天蝎座
血型：O型
武器：长刀 桔梗仙冬月
流派：飞天御剑流
披风重量 ：十贯(出自东立版漫画第九十六幕：按古代一文大约是现在4g左右，一贯所以是4公斤左右，十贯相当于40公斤左右。)
得意技：九头龙闪
必杀：天翔龙闪
飞天御剑流第十三代继承人。是个相当自负的人，亦是剑心的师傅，是一个隐士，认为“剑是凶器，一种杀人的工具”;“御剑流虽然是除强扶弱的剑术，但是如果投身于乱世只能是被政客利用的杀人工具”。虽然不同意剑心的做法，但很关心他并帮助剑心。
斋藤一(配音员：铃置洋孝(日本TV版)成田剑(日本OVA版)，真人演员：江口洋介)
史实人物。新撰组第三队队长，擅长“牙突”刀法，幕府倒台后以新名字“藤田五郎”投身警视厅剑客警备队，以头号密探身份继续新撰组“恶‧即‧斩”的信念。京都篇中大为活跃，人诛篇中只是路过帮了些忙。剑心在最后约战斋藤遭其拒绝，原因是他对再不是拔刀斋的剑心没兴趣;是故事中唯一一个未与剑心分出胜负的对手。已婚，妻子名叫时尾(没有登场)。
电视动画版里京都篇完结时，后面不再登场。
真人电影版提前于东京篇登场。
绯村剑心是日本漫画家和月伸宏的漫画作品《神剑闯江湖》男主角之一，也是主要男主角。原型是幕末四大人斩中的河上彦斋。在广播剧中为绯村剑心配音的声优为绪方惠美。在动画中则是凉风真世。真人版由佐藤健饰演。
原名心太，关西地方出身。“飞天御剑流”的比古清十郎在他父母双亡后收他为徒弟，并把他改名为剑心。本来是长州派维新志士，幕末时期为维新派的杀手，人称“拔刀斋”。维新派成功推翻幕府之际退隐，开始到处流浪。没有武器的话就无法打倒敌人。第一任妻子是雪代巴，却死于剑心刀下。后与薰成亲，生下剑路。
原型是幕末四大人斩中的河上彦斋。
幕末时代(追忆篇)
绯村剑心出生于幕末时代的日本，原名绯村心太。年幼时父母因霍乱而死，在被人口贩子运送的途中被山贼袭击，幸得飞天御剑流的传人比古清十郎所救并收为弟子，比古清十郎认为“心太”一名过于柔弱而将“心太”的名字改为“剑心”。数年后，在修炼剑术期间因与师傅对国家现况意见不同，希望亲手拯救人民的剑心因而出走前往京都。其后参加了桂小五郎、高杉晋作等长州藩维新志士的“奇兵队”募集，因剑术出众而被桂小五郎任命为专门暗杀幕府要员的刽子手。后来因为剑心的剑术使幕府闻风丧胆，加上精于拔刀术而被冠上“刽子手拔刀斋”之名。在一次暗杀幕府要员时，“雪代巴”的未婚夫“清里明良”被剑心斩杀，但清里明良也在剑心的左边脸颊上画下了一道刀伤，剑心当时认为此人虽然剑术并不出色，但因其生存意志非常强烈而使剑心留下深刻印象，脸上的刀伤亦因此持久不褪。而雪代巴为了替未婚夫报仇而接近剑心，雪代巴与剑心相处一段时间后对剑心有所改观。在“池田屋事件”后剑心与雪代巴(绯村巴)以夫妻的身份过着半归隐的生活。在巴完全接受剑心时，指使巴接近剑心的暗杀集团“暗乃武”以巴要胁剑心，剑心为了救巴不惜深入敌人的阵地，却在与最后的敌人交战时错手杀死了巴，巴在死前以短刀划在剑心脸上，与清里先前留下的刀伤交错，形成左边脸颊的十字伤。此事之后桂小五郎亲自拜托剑心转为维新志士前线的游击剑士，继续参与维新革命的战斗。失去挚爱的剑心为了创造新时代而决定复出。
雪代巴留下疤痕有两个版本 漫画&OVA
OVA如上方所示 漫画为雪代巴拿着匕首跑了出来，挡在剑心和头目的中间。头目被巴的举动吓到停止攻击，但是剑心已是闭着眼睛挥斩，这一刀直接把雪代巴跟头目斩杀。就再这一刻，巴手上的匕首顺势滑落，就在剑心的左脸颊上多划了一道。
明治初期
在维新志士于戊辰战争推翻幕府后，剑心决心不再杀人，在腰部佩带由新井赤空所锻造的逆刃刀开始流浪于日本各地。十年后(明治十一年)，在东京遇上神谷薰，并解决“伪·刽子手拔刀斋”的事件，后来剑心得到神谷薰的挽留而在神谷活心流道场居住下来。其后认识了被迫作小偷的前士族的明神弥彦，剑心救出弥彦后说服薰收弥彦为徒。与讨厌维新志士、外号“斩左”的打架高手前赤报队队士相乐左之助决斗后成为好友。从武田观柳手上救出被迫生产鸦片的会津名医高荷惠。其间剑心经历了多次战斗，包括与同是曾为刽子手的鹈堂刃卫的战斗中变回刽子手拔刀斋，幸得薰的呼叫才清醒过来。后来再次与幕末时代的对手前新撰组三番队队长斋藤一的决战后，剑心自觉已经不能压抑心中的刽子手拔刀斋灵魂，加上内务卿大久保利通被志志雄真实一党暗杀，得知志志雄一党阴谋的剑心决定独自前往京都与志志雄一党对决。剑心在京都得到师傅比古清十郎传授飞天御剑流的最终奥义-“天翔龙闪”与次奥义“九头龙闪”，在决战中打败了志志雄。在剑心回到东京后，雪代巴的亲弟“雪代缘”从中国回到日本，并集合了“六人同志”向剑心展开复仇行动。剑心向众人讲述自己与雪代巴的过去，并与神谷薰约定在决战以后会一起生活。后来在神谷活心流道场的决战中，雪代缘捉走神谷薰并制造神谷薰已死的假象引致剑心意志消沈沦落至“落人群”，最后剑心回复斗志并打败雪代缘。雪代缘由神谷薰手上得到雪代巴留下的日记后，从此消失于剑心等人面前。及后被惠告知自己身体最多只能使用飞天御剑流多四、五年;不久剑心与神谷薰结婚并诞下一子“绯村剑路”。数年后剑心将逆刃刀交给元服的明神弥彦。
明治中期
在OVA星霜篇中，明治27年(1894年)发生中日甲午战争。当时抱病在身的剑心应陆军卿山县有朋之请前往中国。其后剑心因意外而失忆，流落于中国。后来得到在世界各地游历的左之助的帮助返回日本，最终能于死去之前回到神谷薰的怀里，听到神谷薰称呼其幼名“心太”，加上左边脸颊上的十字伤已消失，感到其一生罪孽已清，无憾而终，享年45岁。